1.无菌水、生理盐水、磷酸盐缓冲液三者有什么区别?
答:无菌水就是简单的检测水进行灭菌;生理盐水是0.85%的NaCl水溶液;磷酸盐缓冲液一般是选择磷酸二氢钠和磷酸氢二钠按照一定比例配制的缓冲液。在食品微生物检测中,三者主要的区别在于对菌的保护作用。无菌水不存在对菌的保护,因为渗透压的作用,还可能造成菌吸水胀裂死亡;生理盐水的渗透压基本与菌的细胞液相当,会对菌有一定的保护。磷酸盐缓冲液除了在渗透压方面对菌有保护作用,对pH也有一定的缓冲作用,因此对菌有更好的保护。国标要求,微生物检测需要用生理盐水或磷酸盐缓冲液稀释。但也有部分研究表明,检测样品若NaCl含量超过10%也可以使用无菌水稀释,但并未被国家标准认可。
2.食品中致病菌的检测必须在生物安全柜里进行吗?
答:按照国家标准,实验室只有在取得了二级生物安全实验室或以上级别实验室的认证的情况下才可以进行致病菌的检测,并且致病菌的检测必须是在生物安全柜中进行。部分定性实验的前增菌环节(如沙门氏菌的前增菌)理论上可以在超净工作台进行,但严格按照国家标准也是不符合要求的。
3.超净工作台需要定期测风速吗?
答:建议进行。GB4789.1-2016中明确要求:实验室设备应定期进行检查和/或检定、维护和保养,以确保工作性能和操作安全。因此超净工作台不仅应当定期检测风速,也应定期清理过滤网,更换紫外灯等,具体频次可根据实际情况自行决定。并且每次维护应当建立相应的记录。
4.经过灭菌后的平板可以保存多少天,还是只能当天使用?
答:灭菌后的平板当天使用。若是高压蒸汽灭菌后的平板,应当进行烘干,烘干后的平板若当天有剩余,可以放在无菌室内保存,尽量三天之内用完,建议超过七天进行重新灭菌。干热灭菌的平板也应如此。
5.培养基使用完之后,剩余的培养基再次使用是否重新灭菌?
答:不可以。这分为两种情况。第1种情况,已经凝固后重新融化后使用的,根据GB4789.28-2013中明确规定,未用完的培养基不可重新凝固留待下次使用。遇到这种情况,培养基只能弃置,并且国标要求,弃置也需要符合相关法律法规的规定;第二种情况,灭菌后未用完的培养基,可待培养基凝固后再进行保存。但保存条件需避光干燥,保证其成分不会发生改变。再次使用时按照要求进行融化即可,不可二次灭菌。第1次灭菌已开封但未使用完的培养基,不建议再次使用,毕竟存在风险。但若是液体培养基,就不存在融化的过程,灭菌后未使用完毕可按照国标要求保存,使用时需要保证培养基成分不发生改变,不可进行二次灭菌。若无法保证培养基是否符合要求,应当弃置