PEI,商品名称聚乙烯亚胺,是一种碱性阳离子聚合物大量用于纺织和造纸工业。PEI是通过乙烯亚胺的聚合作用得到的碱性多聚体。结构式CH3CH2N--(-CH2CH2-NH-)n-CH2CH2NH2.经典n值为700-2000,相应的聚合物分子质量为30000-90000Da。因为氨基的pKa值为10-11,所以在中性PH溶液中PEI带正电荷。
认为PEI是可溶的DEAE纤维素。PEI可结合带负电荷的大分子,如核酸和酸性蛋白,进而形成PEI的网状结构,随后结合的酸性分子会快速形成沉淀。酸性蛋白质是否可与PEI结合取决于盐溶液的浓度。在较低盐浓度时(0.1mol/LNaCl),微酸性蛋白质会与PEI结合形成沉淀,但在中等盐浓度时(0.4mol/LNaCl),它可以从多聚体上被洗脱下来,变得可溶。强酸性蛋白质在低盐浓度时会与PEI结合,但在中等浓度不会溶解,高盐浓度(0.9mol/LNaCl)时才能被洗脱下来。应该注意的是,当蛋白质从PEI颗粒上被洗脱下来时,蛋白质和PEI本身都会变得可溶。所以在返回到低盐浓度前,需要将PEI从蛋白质中去除。
PEI的沉淀使用策略:
1、在高盐浓度(1mol/L NaCl)采用PEI沉淀。该方法会沉淀核酸,同时几乎所有的蛋白质留存在上清液中。
2、目标蛋白为中性和碱性蛋白质时,在0.1mol/L的NaCl条件下采用PEI沉淀,可以去除酸性蛋白质和核酸。同时目标蛋白质留存在上清液中。
3、目标蛋白质为强酸性蛋白质时(E.Coli RNA聚合酶),a、先用低浓度盐溶液(0.1mol/LNaCl)沉淀所有酸性蛋白质和核酸;b、用中浓度的盐溶液(0.4mol/L)溶解去除微酸性溶液c:用高浓度盐溶液(0.9mol/LNaCL)溶解核酸和强酸性蛋白质;d:硫酸铵沉淀强酸性蛋白。
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